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安捷伦液相色谱仪维修故障诊断

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简介 : 安捷伦液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。主要运用与生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析

产品详细

 
安捷伦液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。主要运用与生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。
 
但是由于人员操作不当、样品的性质以及仪器本身等方面的原因,常常出现这样那样的分析故障,严重影响了正常的生产分析。所以掌握准确、快速的排除仪器故障的方法非常重要。
 
1、柱压高
可能原因:
1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;
2)样品污染沉积;
 
解决方法:
处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;
 
对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子,再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
 
2、指示
可能原因:
1)泵密封垫圈磨损;
2)大量气泡进入泵体。
 
解决方法:
处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
 
3、不稳定
可能原因:
系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。
 
解决方法:
处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
 
4、峰分叉
可能原因:
1)色谱柱被污染;
2)柱头填料塌陷;
 
解决方法:
处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的 长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。
 
对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
 
5、重复性差
可能原因:
1)进样阀漏液;
2)加样针不到位;
3)液量不足;
 
解决方法:
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;
对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。
 
另外日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要:
(1)注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未 用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;
(2)样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;
(3)色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等
 
6. 其它原因及解决方法

故障类型 可能原因 解决方法
基线噪声大 随机性- 污染物积聚冲 冲洗柱;净化样品;使用HPLC级溶剂
连续性- 检测器灯故障 更换紫外灯(寿命为1000小时)
偶然性- 外部电气干扰 使用LC系统专用稳压器
样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6
双峰 样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6
进样溶剂过强 使用较弱的进样溶剂或流动相
滤芯堵塞 更换并使用0.5 μm 孔隙率的在线过滤器
柱有空隙或气沟 用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱
进样器流路不通畅 更换进样器转子
柱头有空隙 使用填料或玻璃珠填充柱顶部
柱上样品超载 使用更高负载量的固定相 增加色谱柱内径 减少样品量
单峰- 存在干扰性组分 净化样品;预分离
拖尾峰 开始出双峰 请参见双峰
存在未扫的死体积 减少接头的数量 确保进样器密封垫紧密 确保接头正确固定
碱性化合物- 硅醇相互作用 换成聚合物固定相
碱性物质- 硅醇相互作用 使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺
硅胶基- 柱降解 使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻
峰展宽 进样量过大 降低进样溶剂的强度以集中溶质
进样阀中的峰扩散 在进样前/后引入气泡以减少扩散
数据系统的采样速率过低 增大采样
检测器时间常数低 调节时间常数使之与峰宽匹配
流动相粘度过高 提高柱温
检测器池容积过大 使用尽可能小的池容积(系统中无热交换器)
注射器体积过大 减少进样量
保留时间长 使用梯度洗脱或较强的流动相
压力波动 单向阀泄漏 更换单向
泵密封垫泄漏 更换泵密封
微粒积聚 过滤样品;在线过滤器;过滤流动相
压力渐增 微粒积聚 过滤样品;在线过滤器;过滤流动相
水/有机系统- 缓冲液沉淀 测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性
保留超出总渗透体积 体积排阻- 特异性相互作用 添加流动相改性剂或更改溶剂
保留时间不断变动 柱温不断变化 使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定
平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或等度洗脱流动相起变化 确信在溶剂改变或梯度结束后至少10 个柱容积通过色谱柱
流动相组分选择性蒸发 减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖好;制备新的流动相
缓冲能力不足 用>20 mM 浓度的缓冲液
在线流动相混合不一致 保证梯度系统输送恒定组成;与手动制备流动相核对
污染积聚 冲洗色谱柱以去除污染物
最初几次进样— 吸附在活性部位 用浓样品进样冲洗柱,使其处于正常状态
保留时间逐渐缩短 流速在增加 检查泵以确保正确;否则需重调
柱上进样超载 减少样品
键合固定相的流失 保持流动相pH 值在2-8.5 间
保留时间逐渐增加 流速在减慢 解决液流中的漏液现象,更换泵密封垫,检查泵的涡流和气泡
硅胶填料的活化点 使用流动相改性剂
键合固定相的流失 保持流动相pH 值在2-8.5 间
流动相组成在变化 确保流动相容器盖好
硅胶填料的活化点 流动相中加竞争碱
硅胶填料的活化点 固定相用更高覆盖度的填充料
灵敏度问题 峰位于检测器线性范围之外 稀释或浓缩使之处于线性区内
最初几次进样—样品在样品池或柱中被吸附自动进样器 流路阻塞 用浓样品处理样品池/柱
自动进样器流路阻塞 检查流量情况,确保无阻塞现象
进样器样品定量管未充满 确保样品池中已充满样品
在样品制品时有关的样品流失 用内标法在制备样品,优化样品制备方法
柱平衡时间减慢(离子对现象) 长链离子对试剂平衡时间慢 使用较短的烷链试剂