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液相色谱仪多久做一次校正合适?

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简介 : 液相色谱的分析过程峰会漂移,这曲线多久做一次?氨基键合的色谱柱流动相为正庚烷,平时怎么活化呢?如果发现液相色谱的分析过程峰会漂移,那就要做曲线了,这个时间可能一周

产品详细

 
液相色谱的分析过程峰会漂移,这曲线多久做一次?氨基键合的色谱柱流动相为正庚烷,平时怎么活化呢?如果发现液相色谱的分析过程峰会漂移,那就要做曲线了,这个时间可能一周,也可以半个月,需要看具体情况。以下分享下高效液相色谱仪(HPLC)校正方法:
 
一、输液系统:
梯度误差GC不超过±3%
泵流量设定值误差 Ss<±2%
流量稳定性误差   SR<±2%
 
二、紫外检测器性能
基线噪声不超过5×10-4AU,基线漂移不超过5×10-3AU
定量测量重复性误差(6次进样)RSD≤1.5%
最小检测浓度不超过1×10-7g/ml萘/甲醇溶液
可调波长紫外可见光检测器波长示值不超过±2nm(HP1100高效液相色谱仪可由仪器自身完成)
 
三、校正条件
环境温度10-30℃,相对湿度低于65%
校正设备
秒表 分度值小于0.1 s
分析天平 最大称量200g,最小分度值0.1mg
容量瓶
微量注射器
标准物质和试剂
HPLC用甲醇、纯水,分析纯的丙酮
1×10-4g/ml,1×10-7g/ml的萘甲醇溶液
紫外波长标准溶液
 
四、校正方法
1、泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的校正
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好,以甲醇为流动相,按表一设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确的收集10-25分钟,称重,按下式计算流动相流量设定值误差Ss和流动相流量稳定性误差SR。公式:Ss=(Fm-FS)/Fs 100%
可接受标准:-2%≤Ss≤2%
SR=(Fmax-Fmin)/F×100%
可接受标准:-2%≤SR≤2%
Ss:流量设定值误差(%);    
Fm=(W2- W1)/ρt.t:流量实测值(ml/min)
W2 :容量瓶+流动相的重量(g);
W1:容量瓶的重量(g);
Fs:流量设定值(ml/min);
ρt:实验室温度下流动相的密度(g/cm3);
t:收集流动相的时间(min);
SR :流量稳定性误差(%);
Fmax 为同一组测量中流量最大值(ml/min);
Fmin:同一组测量中流量最小值(ml/min);
F 为同一组测量值的算术平均值(ml/min)
表一:Ss和SR的校正

流量设定值(ml/min) 1.0 1.5
测量次数 3 3
收集流动相时间(min) 15 10
允许误差 Ss 2% 2%
SR 2% 2%
 
2、基线噪声和漂移
选用C18的色谱柱,以波长254nm,流动相为100%甲醇,流速1.0ml/min,仪器稳定后记录基线30min,求基线噪声Nd。可接受标准:Nd≤5×10-4AU
 
基线漂移用1h内基线偏离原点的值(AU/h)表示。可接受标准:D≤5×10-3AU/h
 
3、梯度误差GC的校正
进行梯度洗脱程序,A溶剂为水,B溶剂为0.1%丙酮的水溶液,B经5个阶段从0变到100%,20%—40%—60%—80%—100%,重复测量两次,取平均值,求各段梯度误差Gci,取最大作为仪器梯度误差,公式:
Gci=(Li—Lm)/Lm×100%
Li:第i段信号值的平均值;    
Lm :各段输出信号平均值的平均值
可接受标准: -3%≤Gci≤3%
 
4、最小检测浓度
以上述色谱条件下,进样20ul的1×10-7g/ml的萘甲醇溶液,计算最小检测浓度CL。公式:
CL=2 Nd C×20HV
Nd:基线噪声,mm;      
C:标准溶液浓度,g/ml;
H:标准溶液色谱峰的峰高,mm;
V——进样体积,ul。
可接受标准:CL≤1×10-7g/ml
 
5、波长示值误差
用注射器将紫外波长标准溶液(标准波长为235nm,257nm,313nm和350nm)从检测器入口注入样品池冲洗,并将池充满,将波长调到低于标准波长5nm处,到标准波长+4nm处,测得的最大吸收值处对应的波长与标准波长之差为波长示值误差;目前仪器可以在1ml/min的流量下,直接用空管连接检测器,每隔2min改变1nm,连续进标准样10ul,同样可得波长示值误差。
 
6、定量测定重复性的校正
将仪器联接好,使之处于正常工作状态,波长254nm,流动相为100%甲醇,流速1.0ml/min,用萘的甲醇溶液连续进样6次记录下峰面积,按下式计算相对标准偏差:
nRSD =   [∑(Xi- X )2]/(n-1)×(1/ X )×100%
I=1RSD:相对标准偏差(%);   n:测量次数; Xi:第I次测量的峰面积
X – n次进样的峰面积算术平均值
可接受标准:RSD≤1.5%
 
 
可调波长紫外可见光检测器波长示值误差 (此项只适用于HP1100高效液相色谱仪且带有HP工作站)。
 
打开HP1100液相色谱仪和HP工作站,打开输液泵和检测器,用纯水冲洗系统直至稳定,进入 Diagnosis窗口,点击氘灯图标,进入 show module tests状态,点击VWD VL calibration test 点击start ,系统自动进入校正状态,待校正完毕,将校正结果打印归档。
 
可接受标准:λ≤2nm
 
五、性能确认
使用标准品或供试品,确认仪器性能符合使用要求;
先进行色谱柱的性能确认,内容包括:分离度,对称因子,理论塔板数和峰面积标准偏差。
 
1、液相色谱柱的确认
测试标准样配制:称量1000mg苯酚,100mg联苯加入到100ml容量瓶中,移入邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯各1ml,然后用甲醇定容到100ml,混匀,从中移取1ml该溶液,用乙腈:水=70:30定容至100ml。
 
法:流动相为乙腈:水=70:30,流速为1.0ml/min,波长为254nm,温度为30℃,进样量为:10ul,运行10min。
 
2、色谱柱:Extend-C18 Analytical, 5um,4.6*250mm。
 
连续进行5次分析,分离度均R>1.5;邻苯二甲酸二乙酯对称因子S在0.80~1.50范围内;邻苯二甲酸二乙酯柱效>3000m-1;邻苯二甲酸二乙酯峰面积的标准偏差应≤1.5%。
 
按照性能确认方法逐步进行,并记录谱图; 根据性能测试的结果,评价仪器是否符合性能要求。
 
六、校正结果处理和校正周期
校正结果全部项目均符合技术要求者,判为合格,方可使用。若某些指标达不到要求,关于仪器情况,仪器负责人以维修报告的形式报于维修相关负责人处理。