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要怎样挑选和使用液相色谱仪的保护柱才对?

     发布日期:2017-07-17 10:44    |   作者:admin 点击:
液相色谱仪租赁
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。在使用液相色谱柱的过程中如果我们稍微操作不当就可能会导致保护住的堵塞和污染,同时,如果没有选择合适的色谱柱也会直接影响到色谱柱的使用特性跟色谱分析的结果,因此,如何正确选择液相色谱柱跟如何正确使用的技巧是我们非常必要掌握的。以下重点介绍下本人积累的一些经验给大家参考交流:

一、如何挑选正确的液相色谱柱?
1、保护住内径
我们要选择与使用的液相色谱柱内径相同或者相当的保护住,否则可能会影响到目标物质分析的结果。
 
2、保护住长短
一般相对较长的保护住的优点是能够更加有效的防止污染物进入色谱柱中,这是因为它所需要填装的色谱填料相对较多。但是其缺点会增加样品的保留时间。所以这就要求我们在满足色谱分离的条件下,尽可能的选择短一点的色谱柱。
 
3、保护住的结构设计
目前保护住的结构设计可分为整体式、手紧式以及直连式3种类型。整体式结构是生产商直接配套安装在液相色谱柱上,方便实用却不能更改。而直连式结构可以将保护住与不同品牌的色谱柱进行连接和实用。手紧式与直连式类似,唯一不同的是在连接时只需用手拧紧即可。
 
4、保护住填料装填方式
选择合适的保护住填料装填方式可以很好的提高液相色谱柱的柱效。目前常用的保护住填料装填方式主要有薄膜填装法,其特点是操作简单且能够干装,所以可以直接在实验室完成,但是所需费用较高。此外我们最好选择与所用色谱柱的填料相同的保护住。
 
5、填料的端基封尾(或称封口)
把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分离;填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱。

6、反相色谱柱子的PH值使用范围
反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的水解;当PH值大于7时硅胶易溶解;经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。

二、在使用液相色谱柱时要注意什么?

1、使用前性能测试-样品前处理
色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
a、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、最好使用流动相溶解样品。

2、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。
当选用最佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意:
a.含水流动相最好在实验前配制,尤其是夏天使用缓冲     溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠,防止细菌生长。
b.流动相要求使用0.45 μm滤膜过滤,除去微粒杂质。
c.使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能。

3、流动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:
a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相与样品不产生化学反应
c、流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效果;降低柱压降,延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。

综上所述,选择与专业的色谱柱相匹配的保护住不仅能够在有效提高色柱效的同时延长液相色谱柱的使用寿命,而且还能非常高效的提高物质色谱分离的效果。所以在实际的应用中我们千万不要忽视了保护住的作用性与重要性,否则就有可能因为一个小的忽视而造成的结果的不理想。

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